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名称 Western及IP細胞裂解液 Cell Lysis Buffer for Western and IP

存储 -20℃保存，12个月有效。

试剂组分

PMSF(100mM)----1.5mL----Store at -20℃（附送）

产品简介

Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，低浓度sodium pyrophosphate等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明

(一)贴壁培养细胞

2、 去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、 NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

4、 10000～12000g，离心 3～5min(如果用冷冻离心机 4℃离心效果更佳)，取上清。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

1、 取 Western 及 IP 细胞裂解液置于室温溶解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。

3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100～200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Western 及 IP 细胞裂解液。通常 6 孔板每孔细胞加入 100μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150～200μl，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

5、 进行后续的 PAGE、 Western、免疫沉淀等操作。

(三)组织样本

2、 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。

4、 按照每 20mg 组织加入 100～200μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 30～60min。

6、 按照每 20mg 组织加入 100～200μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液。

8、 进行后续的 PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

6、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。

附言建议

对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。