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名称 NP-40裂解液 / NP-40 Lysis Buffer

存储 冰袋运输，-20℃保存

试剂A：NP-40 Lysis Buffer----100ml----Store at -20℃

NP-40 Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40等组成。用本裂解液得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

(一)贴壁培养细胞

1.取NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
2.用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
3.10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
4.进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)组织样本

1)在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2)如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3)在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
4)如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5)溶解NP-40 Lysis Buffer时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。
6)细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。
7)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。