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线粒体是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分离法获得，即先低俗出去细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体。

本试剂盒提供了蛋白酶抑制剂PMSF，使匀浆时蛋白酶的活性被适当抑制，这样在获得线粒体的同时还可以获得有时有用的去除了大量线粒体的蛋白，在进行蛋白或酶活分析时可以作为对照

试剂(A): Mitochondria Lysis buffer 100ml -20℃
试剂(B): Trypan Blue Stain 10ml 4℃ 避光（可选）
试剂(C): Wash buffer 100ml -20℃
试剂(D): Mitochondria Stock buffer 10ml -20℃
试剂(E): Protein Stock buffer(5×) 20ml RT
试剂(F): PMSF(100×) 1.5ml -20℃

自备材料：1、 胰蛋白酶；2、 低温离心机、匀浆器；3、 PBS；

操作步骤 (仅供参考) ：

2、裂解：沉淀用 1～2ml 预冷的 Mitochondria Lysis buffer 重悬细胞，冰浴放置 10～15min，可用相差显微镜检测膨胀的程度。

4、立即取匀浆液，加入等量 Wash buffer，轻轻颠倒混匀数次。

6、上清液转移至一干净离心管，4℃ 1000g 离心 5min，重复 2 次。

8、弃上清，沉淀为线粒体，如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀。随后把收集的上清 12000g，4℃离心 10min，上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。获得的细胞浆蛋白应保存于 1×Protein Stock buffer，即按细胞浆蛋白：Protein Stock buffer (5×)=4：1比例混合；如果用于双向电泳，应使用恰当的保存液。

1、试剂(如台盼蓝染色液)对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用。

3、分离线粒体的所有步骤均需在冰上或 4℃进行，所用溶液需冰浴或 4℃预冷，全部操作时间尽量控制在 1h 以内。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。