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操作说明

一. 微孔酶标仪法

1. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积 BCA试剂A 加1体积 BCA试剂B（50:1）配制成 BCA工作液，充分混匀 (混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。

2. 稀释标准品：取 10μL BSA 标准品用 PBS 稀释至 100μL（样品一般可用 PBS 稀释），使终浓度为 0.5mg/ml。将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20 μL加到 96 孔板的蛋白标准品孔中，加 PBS 补足至 20μL。

3. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释），加 20μL到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。

4. 各孔加入 200μL BCA 工作液，37℃放置 15-30 分钟。用酶标仪测定 A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二. 分光光度计法

如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

步骤如下：

2. 稀释标准品：取 100μL BSA 标准品用 PBS 稀释至 1ml（样品一般可用 PBS 稀释），使终浓度为0.5mg/ml。

4. 37℃放置 15-30 分钟。用分光光度计测 562nm 处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。

注意事项：

1. 长期不用时，BCA试剂B与PBS 稀释液可置于 2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂A在低温条件下出现结晶沉淀时，可 37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。

3. 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白不蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。

5. 为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。